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Escherichia coli, E. coli, ist ein Bakterium, das im unteren Darm von Säugetieren wächst. Dieses Bakterium wurde erstmals Ende des 19. Jahrhunderts entdeckt. Seitdem hat es eine lange Tradition in der wissenschaftlichen Forschung. Es ist der am weitesten verbreitete Organismus in der Molekulargenetik. E. coli wird häufig in der wissenschaftlichen Forschung eingesetzt, weil es sich leicht in einem Labor anbauen lässt. Die Faktoren, die das Wachstum von E. coli erleichtern, sind der einfache Nährstoffbedarf, die schnelle Wachstumsrate und der moderate Erhaltungsbedarf.
Sterilisieren Sie die Impföse, indem Sie sie in die Flamme des Bunsenbrenners legen. Führen Sie die untere Hälfte der Schleife durch die Flamme, bis sie rot leuchtet.
Lassen Sie die Schleife abkühlen. Sie können den sterilen Agar auf der Platte damit berühren, um sicherzustellen, dass er abgekühlt ist. Legen Sie die Schlaufe nicht auf den Tisch und lassen Sie sie nicht mit etwas anderem als sterilem Agar oder der gewünschten Kultur in Kontakt kommen, nachdem sie sterilisiert wurde.
Tauchen Sie die Schleife in die E. coli-Kultur und entfernen Sie sie.
Öffnen Sie die Agarplatte und schieben Sie die Schlaufe vorsichtig über die Oberfläche eines Agarabschnitts. Achten Sie darauf, dass Sie mit der Schlaufe nicht durch den Agar kratzen. Der Agar liefert die Nährstoffe, die E. coli zum Wachsen benötigt.
Legen Sie die Schlaufe erneut in die Bunsenbrennerflamme, um sie zu sterilisieren. Sobald der Schlingenstab abgekühlt ist, berühren Sie ihn an einem sterilen Bereich der Platte, um sicherzustellen, dass er abgekühlt ist. Führen Sie dann die Schlinge durch Ihren ersten Streifen, um einen zweiten Streifen zu machen. Dieser zweite Streifen ist eine verdünnte Version des ersten Streifens. Wiederholen Sie diesen Sterilisations- und Gleitvorgang, bis mehrere Abschnitte der Agarplatte übergleitet sind. Der Grund dafür ist, dass Sie später einzelne, klonale Kolonien auswählen können. Dies hilft sicherzustellen, dass Sie mindestens einen Abschnitt mit einzelnen Kolonien haben - nicht zu konzentriert (was zu viel Wachstum hat und Sie nicht aus einer einzelnen Kolonie auswählen können) und nicht zu verdünnt (was keine Kolonien ergeben würde). .
Sterilisieren Sie die Schleife ein letztes Mal in der Flamme, bevor Sie sie im Arbeitsbereich ablegen.
Setzen Sie den Deckel wieder auf die Agarplatte. Drehen Sie die Platte um und legen Sie sie in den auf 37 Grad Celsius eingestellten Inkubator. Diese ideale Inkubationstemperatur simuliert die Temperatur des menschlichen Körpers, in dem sich E. coli befindet. Innerhalb von 24 bis 48 Stunden erscheinen sichtbare Kolonien von E. coli-Bakterien auf der Agarplatte.