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Ein Spektrophotometer wird verwendet, um die Konzentration bestimmter Verbindungen, wie z. B. Protein, in einer Lösung zu bestimmen. Im Allgemeinen scheint Licht durch eine mit einer Probe gefüllte Küvette. Die Lichtmenge, die von der Probe absorbiert wird, wird gemessen. Da Verbindungen Licht in unterschiedlichen Spektralbereichen absorbieren, muss für die Analyse die richtige Wellenlänge eingestellt werden. Es gibt zahlreiche Möglichkeiten, die Konzentration unbekannter Proben durch Spektrophotometrie zu berechnen. Die Verwendung von Referenzstandards bietet jedoch die beste Genauigkeit. Darüber hinaus geben Standards auch an, ob das Spektralphotometer fehlerhaft funktioniert oder andere Probleme bei der Analyse vorliegen.
Berechnung durch Geradengleichungen
Analysieren Sie die Referenzstandards zu Beginn der Analyse. Standards sind bekannte Konzentrationen und werden zur Kalibrierung von Geräten und zur Überprüfung der Genauigkeit verwendet. Alle Proben sollten in den Arbeitsbereich der Normen fallen. Wenn nicht, müssen die Proben verdünnt oder die Konzentration der Standards erhöht werden.
Erstellen Sie ein Streudiagramm oder ein Liniendiagramm mit Standardwerten für Konzentration und Saugfähigkeit. Die Konzentration liegt auf der y-Achse, die Saugfähigkeit auf der x-Achse. Zum Beispiel sind die Standards 1 ppm, 2,5 ppm und 5 ppm. Das angegebene Absorptionsvermögen betrug 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 und 5 ppm = 0,75.
Formatieren Sie die Trendlinie, um eine Gleichung im Diagramm anzuzeigen. Die Gleichung zeigt die Formel y = mx + b. Unter Verwendung der Standards in Schritt 2 lautet die Gleichung zum Beispiel y = .1224x + 0.1531. Die meisten Trendlinien werden bei Null abgefangen, dies hängt jedoch von der Analysemethode und dem R-Quadrat-Wert ab.
Analysieren Sie unbekannte Proben und zeichnen Sie die Absorptionswerte auf.
Verwenden Sie die Gleichung (y = mx + b), um die Konzentration der Proben zu bestimmen.
Grundlegendes zur Geradengleichung
Sei "Y" gleich der Konzentration. Dafür wird es gelöst.
"X" sei gleich der Saugfähigkeit der Probe. Dies ist die vom Spektralphotometer gemessene Absorption.
Lassen Sie "" der Steigung und "b" dem y-Achsenabschnitt entsprechen. Beide sind gegeben, wenn jedoch die Trendlinie durch 0 gezwungen wurde, wird "b" 0 sein.
Nach Konzentration suchen. Verwenden Sie das Beispiel in Schritt 3, und setzen Sie "x" als gegebenes Absorptionsvermögen von 0,563 ein. Deshalb:
y = 0,1224 (0,563) + 0,1531
y (Konzentration) = 0,22011